Ултрафилтрација шупљих влакана од 300 кд: Анализа високог{1}}ефикасног процеса концентрације и пречишћавања за вирус-и-о/А вируса болести стопала и уста
Sep 03, 2026| Увод
Болест-и-шапа (ФМД) је акутна, фебрилна и веома заразна болест животиња узрокована вирусом-и-ифусне болести (ФМДВ). Овај вирус погађа парна{5}}папкаре, са преко 70 осетљивих врста. Брзо се шири и има високу стопу морбидитета, обично погађа главне стоке као што су свиње, овце и говеда, где инциденција може да достигне 100%. ФМДВ припада родуВирус-и-вируса за устаиз породице МицроРНАвиридае. Честице су сферичне, пречника приближно 27-30 нм, са коефицијентом седиментације од 146С за интактне вирусне честице. Тренутно су доступне различите вакцине против ФМД-а, укључујући атенуиране живе вирусне вакцине, живе вирусне векторске вакцине, инактивиране вакцине, вакцине нуклеинске киселине, вакцине са синтетичким пептидима и подјединичне вакцине. Инактивиране вакцине против ФМД генерално имају мање нежељених ефеката код животиња, а мултивалентне вакцине нуде бољу ефикасност имунизације, што их чини главним упориштем у превенцији ФМД у Кини.
Ултрафилтрација тангенцијалног протока
Тренутно је ултрафилтрација тангенцијалног протока уобичајена метода пречишћавања и концентрације у -производњи-и-мултивалентних инактивираних вакцина за болест шапа и шапа. Овом методом не само да се постиже жељени фактор концентрације већ се уклања и велика количина страних нечистоћа. Ултрафилтрација тангенцијалног тока се углавном користи за пречишћавање, концентрацију и филтрацију (одсољавање и замена пуфера). Поред тога, може се користити и за бистрење ферментационог бујона или медијума за ћелијску културу коришћењем микрофилтрације тангенцијалног тока, чиме се замењује центрифугирање или примарно бистрење.
У конвенционалној вертикалној филтрацији, велики молекули имају тенденцију да се агрегирају на површини мембране, зачепљујући филтер. Тангенцијална филтрација протока, међутим, омогућава протоку да иде паралелно са мембраном, избегавајући овај проблем зачепљења. Током филтрације тангенцијалног тока, растварач и супстанце мање од величине пора мембране које продиру кроз мембрану називају се пермеат, док се супстанце веће од величине пора задржавају као концентрат. У комбинацији са оптимизованим процесима прања и филтрације, може се постићи одвајање и пречишћавање молекула различитих величина. Ова технологија нуди предности као што су ниска цена, благи услови рада, практично чишћење и замена, висока брзина протока мембранског пермеата и једноставан рад, што је чини посебно погодном за велике-концентрације и пречишћавање биоактивних супстанци.
Материјали и методе
Колона од шупљих влакана:Граница молекулске тежине од 300 кд, површина мембране од 1600 цм².
Материјали:По 5,6 л супернатанта из ФМДВ типа О и типа А након центрифугирања и бистрења.
Параметри процеса:Током концентрације ултрафилтрације, сила смицања је подешена на приближно 3000⁻¹, а ТМП је контролисан да не буде већи од 10 пси. Када се фактор концентрације приближи 11 пута, узорак је испран са 6ЦВ пуферским раствором. Након прања, стерилни ваздух је уведен у улазну цев, а сав концентровани узорак у цеви је убризган у боцу за концентрацију узорка. Затим је додат стерилни ПБС за испирање цеви све док коначна запремина концентроване течности не буде 500 мЛ, чиме се побољшава укупна стопа опоравка.
Резултати и дискусија
У погледу почетног пречишћавања вируса, ултрафилтрациона концентрација постиже стопу уклањања од преко 90% за нечистоће као што су протеини који не садрже вирусе. Што се тиче запремине, може постићи високе концентрације од 10-50 пута, пружајући снажну подршку за накнадно пречишћавање. Одабрана је колона од шупљих влакана са граничном молекулском тежином од 300 кд. Ова величина пора, задржавајући преко 85% вируса, може уклонити преко 90% протеина нечистоћа. Површина мембране је 1600 цм², а проток је 2-5 мЛ/цм², што омогућава да се концентрација ултрафилтрације заврши у ефективном времену (у року од 2 сата). Детаљни подаци о концентрацији ултрафилтрације и пречишћавању приказани су у табели 1.
Табела 1. Резултати укупне детекције антигена -и-флекса (типови О и А)
| Сампле Наме | Течна храна | Запремина (мЛ) | 146С Садржај (уг/мЛ) | 146С стопа опоравка (%) | Концентрација протеина (уг/мЛ) | Стопа уклањања протеина (%) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| О-тип | Оригинално решење | 5600 | 2.53 | 87.94 | 5040 | 94.38 |
| О-тип | Концентриши се | 500 | 24.92 | 87.94 | 3170 | 94.38 |
| А-тип | Оригинално решење | 5600 | 3.37 | 94.80 | 5980 | 93.55 |
| А-тип | Концентриши се | 500 | 35.78 | 94.80 | 4318 | 93.55 |
Разматрање методе пречишћавања
Тренутно постоје различите методе пречишћавања, али чак и са истом методом за исти антиген, ефекат пречишћавања је често незадовољавајући из много разлога, укључујући карактеризацију антигена и параметре процеса. На пример, промене у узводном молекуларном дизајну или системима културе ферментације могу изменити вирусну молекуларну структуру, што доводи до незадовољавајућих резултата пречишћавања. Неодговарајуће методе бистрења могу повећати трошкове сировина или количину хетерологног протеина, повећавајући притисак на даље пречишћавање. Неодговарајућа концентрација ултрафилтрације, као што су различите величине пора ултрафилтрационе мембране, фактори концентрације и елуције, улазне брзине протока, брзине филтрације и ТМП, могу довести до ниских стопа опоравка антигена. Обимна пракса показује да лоше пречишћавање може изазвати значајне нежељене реакције код животиња након имунизације, што потенцијално доводи до смрти.
Закључак:Ова студија показује да, у процесима тангенцијалног протока, одабиром одговарајуће величине пора мембране (300 кд), односа испирања, улазног протока и ТМП, могу се обезбедити и висока стопа опоравка и максимално уклањање нечистоћа.